Quantifizierung synaptischer Körper mit Hilfe der Disector-Methode

Holger Jastrow, Marc-A. von Mach und Lutz Vollrath
Anatomisches Institut, Johannes Gutenberg-Universität Mainz, Becherweg 13, D-55128 Mainz

Der Disector ist eine objektive Methode zur Quantifizierung von unterschiedlich großen Teilchen in einem vorgegebenen Volumen. Hierbei werden nur diejenigen Partikel gezählt, deren Profile auf nur einem von zwei benachbarten Schnitten angetroffen werden, womit die Methode unabhängig von der Größe und Form der untersuchten Objekte wird. Üblicherweise werden Disector-Zählungen von Partikeln am Transmissionselektronenmikroskop (TEM) auf Fotografien korrespondierender Areale von Folgeschnitten in einem objektiven Zählrahmen durchgeführt (physikalischer Disector). Eine Modifikation dieser Vorgehensweise wurde für die Quantifizierung synaptischer Körper in der Zirbeldrüse entwickelt, da diese sehr selten und klein sind (ca. 300 x 150 x 35 nm). In diesem Falle würde die fotografische Dokumentation eine immense Anzahl von Bildern bei hoher Vergrößerung erfordern, um statistisch verläßliche Aussagen zu erhalten.
Mit der hier demonstrierten Vorgehensweise wurden große korrespondierende Gewebsareale entlang der Schnittränder untersucht. Die Größe der untersuchten Flächen war definiert durch das Produkt aus Schnittkantenlänge abzüglich einer Sicherheitszone und dem Bildschirmdurchmesser des TEM. Das resultierende Volumen hing von der Schnittdicke ab, die etwa ein Drittel bis ein Viertel der Durchschnittsgröße der untersuchten Teilchen betragen sollte. Die Zählungen wurden simultan auf beiden Schnitten durchgeführt, wodurch sich das untersuchte Volumen verdoppelte.
Im Vergleich zu 90 angeschnittenen Strukturen in einer Fläche von 20,000 µm² (Standard) fanden sich bei einer Schnittdicke von 50 µm in der vorgestellten Studie ca. 30 synaptische Körper pro 1.000 µm³. Da diese Modifikation der Disector-Methode sehr zeitaufwendig ist, ist es sinnvoll zunächst aus beiden Werten einen Faktor zu bestimmen, der es innerhalb einer Versuchsgruppe ermöglicht, von Standardzählungen auf Werte in einem Volumen hoch-zurechnen.


This oral presentation was held at Erster Mainzer Zirbeldrüsentag at Mainz, Germany, 1 May 1997, presentation No. 9


Links to Dr. Jastrow's
posters and publications
Homepage (English)
Homepage (Deutsch)